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Human (SOX2) ELISA KIT ( 人轉(zhuǎn)錄因子SOX2 )

品牌:NEWLF   
價(jià)格:1600/2200
規(guī)格:48T/96T
貨號(hào):NLH7793

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Human (SOX2) ELISA KIT ( 人轉(zhuǎn)錄因子SOX2 )

品牌:NEWLF   
價(jià)格:1600/2200
規(guī)格:48T/96T
貨號(hào):NLH7793
應(yīng)用:雙抗夾心

  • 產(chǎn)品詳情
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  • 用途

     

        本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中轉(zhuǎn)錄因子 SOX2(SOX2)含量。

     

     


     

    實(shí)驗(yàn)原理

     

        本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人轉(zhuǎn)錄因子 SOX2(SOX2)水平。用純化的人轉(zhuǎn)錄因子 SOX2(SOX2)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入轉(zhuǎn)錄因子 SOX2(SOX2),再與 HRP 標(biāo)記的轉(zhuǎn)錄因子 SOX2(SOX2)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的轉(zhuǎn)錄因子 SOX2(SOX2)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長下測定吸光度(OD 值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人轉(zhuǎn)錄因子SOX2(SOX2)濃度。

     

     


     

    基本性能

     

             

            性能

    靈敏度

     

    6.25ng/L

     

    檢測范圍

     

    25ng/L -900ng/L

     

    特異性

     

    可檢測樣本中的計(jì)算樣品中人轉(zhuǎn)錄因子SOX2(SOX2)濃度。其他類似物無明顯交叉反應(yīng)。

     

    重復(fù)性

     

    板內(nèi),板間變異系數(shù)均《10%

     

     


     

    試劑盒組份及儲(chǔ)存

     

     

                中文名稱

    規(guī)格

    開封后保存條件

    ELISA 酶標(biāo)板

     

    96T :  8 孔×12 條

    48T :  8 孔×6 條

    2-8℃ 90天

    標(biāo)準(zhǔn)品

     

    96T :  0.5ml x1   (1600ng/L)

    48T 0.25mlx1

    2-8℃ 90天

    HRP標(biāo)記抗體

     

    96T :  6mlx1

    48T 3mlx1

    2-8℃ 90天

    樣品稀釋液

     

    96T :  1.5mlx1

    48T 1mlx1

    2-8℃ 180天

    標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

     

    96T :  6mlx1

    48T :  3mlx1

    2-8℃ 180天

    顯色劑A

     

    96T :  6mlx1

    48T :  3mlx1

    2-8℃(避光)  180天

    顯色劑B

     

    96T :  6mlx1

    48T  3mlx1

    2-8℃(避光)  180天

    終止液

     

    96T :   6mlx1

    48T :  3mlx1

    2-8℃ 180天   180天

    30倍濃縮洗滌液

     

    96T :  20mlx1

    48T 10mlx1

    2-8℃ 180天   180天

    說明書

    1份

     

    質(zhì)檢報(bào)告

    1份

     

    密封袋

    1個(gè)

     

     

    說明;未拆封的試劑盒可以在2-8℃ 保存六個(gè)月.

     

     

    試劑盒所需自備物品。

     

     1.酶標(biāo)儀(450nm波長濾光片) 

     2.高精度移液器,EP管及一次性吸頭:0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL 

     3.37℃恒溫箱 

     4. 雙蒸水或去離子水 

     5. 吸水紙 

     6. 加樣槽

     

    樣品收集方法(具體處理方法請咨詢

     

    1.  血清:用無菌管收集,室溫血液自然凝固10-20分鐘,2-8℃條件離心20分鐘左右  (2000-3000轉(zhuǎn)/分)仔細(xì)收集上清,保存過程中  如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。

    2.  血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、肝素鈉或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成應(yīng)該再次離心。

    3.  尿液:用無菌管收集,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

    4. 組織勻漿:用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液,稱重后將剪碎的組織與 對(duì)應(yīng)體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比如1g的組織樣品對(duì)應(yīng)9 mL的PBS,具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適 當(dāng)調(diào)整,并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,在冰上充分研磨。為了進(jìn)一步 裂解組織細(xì)胞,可以對(duì)勻漿液進(jìn)行反復(fù)凍融或超聲破碎。最后將勻漿液于2-8℃,5000×g 離心5-10分鐘取 上清檢測。

    5.  細(xì)胞提取液:貼壁 細(xì)胞用冷的PBS輕輕清洗,然后用胰蛋白酶消化,1000×g離心5分鐘后收集細(xì)胞。懸浮 細(xì)胞可直接離心收集。收集的細(xì)胞用冷的PBS洗滌3次。每106個(gè)細(xì)胞中加入150-200 μL PBS重懸(推薦在PBS 中加入蛋白酶抑制劑;若含量很低可減少PBS的體積)并通過反復(fù)凍融或超聲使細(xì)胞破碎。將提取液于2-8℃,1500×g離心10分鐘,取上清檢測。

    6. 細(xì)胞培養(yǎng)上清或其他生物體液;收集液體后于2-8℃,1000×g離心20分鐘,除去雜質(zhì)及細(xì)胞碎片,取上清檢測。

     


     

    試劑盒注意事項(xiàng)

     

    1. 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未 用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。 

    2. 濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。 

    3. 各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間最好 控制在 5 分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。 

    4. 請每次測定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,最好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本 OD 值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的 OD 值),請先用樣品 稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測定,計(jì)算時(shí)請最后乘以總稀釋倍數(shù)(n×5) 

    5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。 

    6. 底物請避光保存。 

    7. 嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn). 

    8. 所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。 

    9. 本試劑不同批號(hào)組分不得混用。

     

    |  樣本收集注意事項(xiàng)

     

    1. 不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

    2. 標(biāo)本采集后盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn),若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

    3. 我們羅列的是通用的樣本處理方法,無法涵蓋各種樣本,對(duì)于一些特殊樣本,建議實(shí)驗(yàn)人員多參考已發(fā)表的文獻(xiàn),自行設(shè)計(jì)合理的樣本 處理方法。

     

     

    |  檢測前準(zhǔn)備工作

     

    1. 請?zhí)崆?0分鐘從冰箱中取出試劑盒,以平衡至室溫。

    2. 用雙蒸水將30×濃縮洗滌液稀釋成1×工作液。未用完的放回4 ℃。

    3. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。

     

       

     

    800ng/L

     

     

    5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

     

    150μl 原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

     

    400ng/L

     

     

    4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

     

    150μl 的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

     

    200ng/L

     

     

    3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

     

    150μl 的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

     

    100ng/L

     

     

    2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

     

    150μl 3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

     

    50ng/L

     

     

    1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

     

    150μl 的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

     

    |  操作步驟

     

    1. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、  待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加 樣 50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液. 40μl,然后再加待測樣品 10μl(樣品最終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底 )部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。 

    2. 溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。  

    3. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此  重復(fù) 5 次,拍干。 

    4. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl,空白孔除外。 

    5. 溫育:操作同 2 

    6. 洗滌:操作同 3 

    7. 顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘. 

    8. 終止:每孔加終止液 50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。 

    9. 測定:以空白孔調(diào)零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。測定應(yīng)在加終 止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。 

      

    |  操作一覽表  

     

                                           

     

     

      

    |  結(jié)果判斷

     

     1. 每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)本的OD 值應(yīng)減去空白孔的OD值。

     2. 以標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為橫坐標(biāo),OD 值為縱坐標(biāo),利用計(jì)算機(jī)軟件采用直線回歸的擬合方法創(chuàng)建標(biāo)準(zhǔn)曲線方程,通過樣本的吸光度(OD值),利用方程計(jì)算樣品的濃度值。

     3. 若樣本的OD值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線上限,應(yīng)適當(dāng)稀釋后重測,計(jì)算濃度時(shí)應(yīng)乘以稀釋倍數(shù)。

     

     

     |  示例曲線

     

     由于實(shí)驗(yàn)操作條件的不同(如操作者、移液技術(shù)、洗板技術(shù)和穩(wěn)定條件等),標(biāo)準(zhǔn)曲線的OD值會(huì)有所差異。詳情請看質(zhì)檢報(bào)告.

     

     

      

       

     

     

     

     

     

     

     

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